Microscopie épifluorescence

La plateforme possède 3 microscopes plein champs permettant l’acquisition de matériel fixé en fluorescence, un microscope plein champs équipé d’une caméra couleur, un microscope de routine à fluorescence pour l’observation de cellules vivantes et un ordinateur d’analyse équipé des logiciels Fiji et Icy. Ces équipements sont réservés à l’usage interne des membres de l’UMR7216.

Image artistique de méduses, en référence aux méduses bioluminescentes d’où est extraite la GFP (Green Fluorescent Protein) qui a révolutionné le monde de l’imagerie.

© Image par Carol-Ann Bussières de Pixabay

Caractéristiques techniques :

Leica DMI-6000B

Microscope inversé à épifluorescence
Piloté en X, Y et Z
Filtres et objectifs pilotés

Caméra:
Caméra CCD -30ºC régulée
CoolSNAP HQ2 14bits
Taille d’image : 1392×1040 pixels
Taille de pixel : 6.45 x 6.45μm

Illumination :
Lumière visible (halogène)
Lampe à fluorescence CoolLED pE-300 White Series

Logiciel d’acquisition :
Metamorph avec module Multi-Dimentional Acquisition

Objectifs :

Mag. N.A Quality

Transmission

Contrast

 

 Imm.

Pixel size

(binning 1)

 XY max resolution at 488nm Z max resolution at 488nm
10X 0,25 N PLAN PH1 Air 0,645 μm 1,071 µm 22,4 µm
20X 0,35 N PLAN PH1 Air 0,3225 μm 765 nm 11,4 µm
40X 0,6 HCX PL Fluotar PH2 Air 0,161 μm 446 nm 3,9 µm
40X 1,25-0,75 HC PL APO CS – Oil 0,161 μm 214 nm 898 nm
63X 1,40-0,6 HCX PL APO – Oil 0,072 μm 191 nm 716 nm
100X 1,40 HCL PL APO CS PH3 Oil 0,0645 μm 191 nm 716 nm

D’autres objectifs et filtres sont disponibles et peuvent être installés à la demande :

Filtres :

Name

Colour

Excitation Filter BP

Dichroic Mirror

Suppression Filter BP

A4

Blue

360/40

400

470/40

GFP

Green

470/40

500

525/50

Y3

Orange (Cy3)

545/30

565

605/70

TX2

Red

560/40

595

645/75

Y5

Far red (Cy5)

620/60

660

700/75

Analyzer cube

–

–

–

Analyzer

D’autres objectifs et filtres sont disponibles et peuvent être installés à la demande :

Mag. N.A Quality

Trans

Contrast

 

 Imm.

Pixel size

(binning 1)

 XY max resolution at 488 nm Z max resolution at 488nm
2,5X 0,07 HC FL PLAN – Air 1.816 μm 3,8 µm 28,6 µm
20X 0,7 HCL PL APO CORR – Oil/Gly 0,227 μm 383 nm 2,8 µm
40X 1,25-0,75 HC PL APO – Oil 0,1135 μm 214 nm 898 nm
100X 1,40-0,7 HCX PL APO – Oil 0,0454 μm 191 nm 716 nm

 

Name

Colour

Excitation Filter BP

Dichroic Mirror

Suppression Filter BP

A4 (XF131)

Blue

387/28

410

450/65

GFP (QMAX green)

Green

450-490

500

510-560

Y3

Orange (Cy3)

545/40

565

610/75

TX2

Red

560/40

595

645/75

Y5

Far red (Cy5)

620-60

660

700-75

Analyzer cube

–

–

–

Analyzer
Zeiss Apotome 2

Microscope inversé à épifluorescence avec module de déconvolution Apotome 2 avec chambre d’incubation + CO2

Utilisation possible en plein champs traditionnel, ou avec sectionnement optique Apotome.

Caméra : Caméra monochrome CMOS 16 bits Hamamatsu Orca 4.0 LT

Nombre de pixels : 2048 x 2048

Taille de pixel : 6.5 x 6.5µm

Illumination :
Lumière visible (halogène)
Lampe fluorescente X-cite série 120Q (halogénures de mercure, 3000h max)

Logiciel d’acquisition :
Zen 3.2 Blue Edition

Objectifs :

Mag.

N.A

Quality

Transmission

Contrast

Imm.

XY Max resolution at 488 nm

Z max resolution at 488 nm

10X*

0,45

Ph1 Plan Apo

Phase

Air

799 nm

19,8 µm

20X

0,4

LD Korr Ph2/DIC Plan Neofluar

DIC

Air

184 nm

558 nm

20X

0,8

Ph2/DIC Plan Apo

Phase / DIC

Air

171 nm

438 nm

40X

1,30

Ph3/DIC Plan Apo

Phase / DIC

Oil

400 nm

3,3 µm

63X*

1,4

Ph3/DIC Plan Apo

Phase / DIC

Oil

200 nm

697 nm

63X

1,46

Korr TIRF DIC Plan Apo

DIC

Oil

200 nm

697 nm

100X

1,46

DIC Plan Apo

DIC

Oil

200 nm

697 nm

Filtres :

Name

Colour

Excitation Filter BP

Dichroic Mirror

Suppression Filter BP

Filter set 49

Blue

365

395

420-470

Filter set 38

Green

450-490

495

500-550

Filter set 46*

YFP

488-512

515

520-550

Filter set 43

Ds-Red

538-562

570

570-640

Filter set 63

mRFP

560-584

590

598-660

Filter set 50

Cy5

625-562

570

570-640

*pas installé par défaut

Leica DMI8 Thunder

En procedure d’achat

Leica DM IL LED (Live)

**Gants et blouse obligatoires sur ce poste**

Microscope inversé épifluorescence

Caméra :
Caméra CCD -60ºC régulée
Hamamatsu digital camera C4742-98-24ERG 12 /14 bits
Taille d’image : 1344×1024
Taille de pixel : 6.45 x 6.45μm

Illumination :
Lumière visible (halogène)
Lampe à fluorescence Leica

Logiciel d’acquisition :
MicroManager

Objectifs :

Mag. N.A Quality Transmission
Contrast		 Imm. Pixel size
(binning 1)		 Max resolution at 488 nm
10X 0,25 N PLAN PH1 Air 0,645 μm 1,2 µm
20X 0,35 N PLAN PH1 Air 0,322 μm 850 nm
40X 0,55 CORR PH2 Air 0,161 μm 541 nm

Filtres :

Name Colour Excitation Filter BP Dichroic Mirror Suppression Filter BP
B/G/R Blue/Green/Red 420/30 ; 495 /15 ; 570/20 415 ; 510 ; 590 465/20 ; 530 /30 ; 640/40
GFP ET Green      
TX ET Red      

 

 

Leica DMRA2 (Couleur)

Microscope droit épifluorescence
Piloté en X, Y et Z

 

Camera :
Caméra couleur CCD numérique 5Mpixels
Leica DFC 450C refroidie
(Δ –20ºC comparé à la température ambiante)
Taille d’image : 2560×1920
Taille de pixel : 3.4 x 3.4μm

Illumination :
Lumière visible (halogène)

Objectifs :

Mag. N.A Quality Transmission
Contrast		 Imm. Pixel size
(binning 1)		 Max resolution at 488 nm
10X 0,30 HC PL Fluotar – Air 0,34 μm 992 nm
20X 0,50 HCX PL Fluotar – Air 0,17 μm 595 nm
40X 0,75 HCX PL Fluotar – Air 0,085 μm 397 nm
100X 1,40-0,7 HCX PL APO CS – Oil 0,034 μm 212 nm
Station de travail "Angus"

Une station de travail pour l’analyse d’images est disponible. Cette station est équipée des logiciels gratuits FIJI, IMAGEJ, ICY.

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